薄层鉴别心得体会
如何保证所建立的薄层色谱鉴别方法的专属性
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薄层鉴别中展开距对实验的影响
展距长,各个物质的分离更大,能够提高分离效果。
但是斑点的扩散也更大,影响了斑点的集中。
薄层色谱法及高效液相色谱法鉴别药物的依据分别是什么?
薄层色谱法(The layer chromatography,TLC)是将固定相均匀的涂布在具有光洁表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层,在此薄层上进行色谱分离的方法,它属于平板色谱,是一种常用的色谱分离方法。
TLC法被许多国家药典用于药物中杂质的检查、药物分析等方面,且是目前药典中收载最多的鉴别与有关物质检查方法之一,具有设备简单、操作简便、分离速度快,灵敏度和分辨率较高等优点。
而薄层色谱在药物分析中,则常用薄层色谱扫描法,其主要用于以下几个方面: 1、中药材与中成药的鉴别与成分分析 2、 合成药物及其制剂分析 3、药物代谢研究 4、抗菌素分析 5、中药的TLC指纹图谱鉴别 高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \\\\ HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。
该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。
是20世纪70年代迅速发展起来的一种高效、快速、高选择性、高灵敏度的新型分离分析技术,是经典液相色谱的发展。
高效液相色谱法在药物分析中的应用主要是鉴别相关物质、检查药物中有关物质的含量限度,测定有效成分或主要成分含量。
1、在药物鉴别中的应用 在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关,是定性的参数,可用于药物的鉴别,在中国药典中就有大量的药物采用此法进行鉴别。
2、在杂质检查中的应用 历年来各国药典中收载了多种药物采用HPLC法进行杂质检查的方法,并且可采用HPLC法进行杂质检查的药物种类在逐年颁布的药典中有所增加。
3、在含量测定中的应用 用高效液相色谱法测定合成药及其制剂的含量,可以消除药物中的杂质,制剂中的附加剂及共存药物的干扰。
薄层鉴别中产生边缘效应的原因是什么
主要由于展开剂的挥发性
人参皂感苷Rb1如何做薄层鉴别
痛舒片是在痛舒胶囊的基础上经改变剂型而研制的新药,包括灯盏细辛、三七、七叶莲、栀子、甘草等八味中药。
具有活血化瘀,舒筋活络,化痞散结,消肿止痛的功效。
在临床上用于跌打损伤,风湿性关节痛,肩周炎,痛风性关节痛,乳腺小叶增生。
三七及灯盏细辛是方中的主药,为更好的控制产品质量,根据三七、灯盏细辛所含化学成分的不同,采用了薄层色谱法对其进行了定性分析,准确地将待检成分检出。
仪器及材料 硅胶G(青岛海洋化工)、人参皂苷Rg1(中国药品生物制品检定所)、三七皂苷R1(中国药品生物制品检定所)、野黄芩苷(中国药品生物制品检定所)、其他试剂均为分析纯。
方法与结果 2.1 三七的鉴别 2.1.1 供试品溶液的制备 取本品4片,除去包衣,研细,加水浸润,搅匀,加水饱和的正丁醇20ml,超声处理30分钟,取正丁醇液,用正丁醇饱和的水60ml,振摇洗涤,取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
2.1.2 对照品溶液的制备 取人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品,分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。
2.1.3 阴性对照溶液的制备 取缺三七药材的药品,按供试品溶液的制备方法,制成阴性对照溶液。
2.1.4 薄层层析照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿—甲醇—水(7∶3∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘15分钟。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;置紫外光灯(365nm)下检视,显相同的荧光斑点。
阴性对照液色谱无此斑点。
(见图1) 2.2 灯盏细辛的鉴别 2.2.1 供试品溶液的制备 取本品12片,除去包衣,研细,加甲醇30ml超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加0.5ml甲醇溶解,作为供试品溶液。
2.2.2 对照品溶液的制备 取野黄芩苷对照品适量,加甲醇制成1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺灯盏细辛药材的药品,按供试品溶液的制备方法,制成阴性对照溶液。
2.2.4 照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述两种溶液各10µl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5: 3:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
阴性对照液色谱无此斑点。
(见图2)讨论 本实验中三七和灯盏细辛均采用超声提取的方法,都获得了满意的提取效果。
在实验中要注意的是三七展开前,展开剂在层析缸中一定要充分饱和,否则易出现边缘效应。